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      產品名稱:

      pK19mobSacB-T7 polymerase原核載體

       
      產品編號: YM2637 
      pK19mobSacB-T7 polymerase原核載體
      產品名稱:pK19mobSacB-T7polymerase原核載體
      規格:0.5-2ug質粒干粉
      貨號:YM2637

      基本信息:
      別名:T7polymerase
      原核抗性:卡那霉素Kan
      篩選標記:自殺基因SacB
      克隆菌株:大腸桿菌DH5α
      培養條件:LB培養基/37℃

      質粒圖譜



      擴增流程:
      收到產品后,請先根據產品管壁標簽來判斷產品形式,并在擴增前準確查找該質粒的抗性、感受態和培養溫度。
      1、質粒干粉(請務必轉化挑單克隆重提后使用)
      ①收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl無菌水溶解質粒;
      ②取2μl質粒加至100μl感受態中,冰浴30min后,42℃熱激60s,不要攪動,再冰浴2min;
      (從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作)
      ③加入500μl無抗的LB液體培養基,180rpm震蕩培養45min;
      ④取10μl、100μl復蘇液,并分別涂布至目標質??剐缘腖B平板上;
      (可使用本平臺的平板涂布專用玻璃珠進行涂布,可以比傳統涂布方法獲得更多轉化子)
      ⑤將平板正向培養1h,再倒置37度培養16h。如果要求是30度則培養20h;
      (如果菌落過多,請將質粒稀釋后再轉化。如果無菌落,請加入10μl質粒離心全涂轉化)
      ⑥挑取單菌落至LB液體培養基中,加入對應抗生素,220rpm震蕩培養14h,根據實驗需要和質粒提取試劑盒說明書提取質粒。

      2、甘油菌:四區劃線后挑單菌落培養,酵母菌需要先液體復蘇再四區劃線,再挑單菌落液體培養。
      3、穿刺菌:穿刺接種,液體培養后四區劃線,再挑單菌落液體培養。
      4、平板:直接挑取單菌落至液體培養基中。
      5、液體質粒:單獨提取的液體質粒收到后可直接使用。
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